Tecnologias de Recombinação

Objetivos

Pretende-se que, no fim desta unidade curricular os alunos percebam em que consistem as estratégias que baseiam a tecnologia do DNA recombinante, quais são as ferramentas utilizadas na manipulação de genes; como esta tecnologia abrange múltiplos domínios das ciências da vida, e algumas das suas aplicações atuais. Pretende-se que os estudantes adquiram conhecimentos sobre algumas das tecnologias de recombinação que permitem a clonagem de genes, a construção de bibliotecas genómicas, o mapeamento e identificação de genes, a análise de expressão génica, a expressão heteróloga de genes e mutação dirigida.

Programa

Recombinação de DNA in vitro: enzimas de restrição e ligases; vectores de clonagem e clonagem de genes.

Métodos para introdução de DNA recombinante em células e selecção de clones.

Construção de bibliotecas genómicas.

Expressão homóloga e heteróloga de genes: sistemas/vectores de expressão.

Análise do nível de expressão de genes.

Detecção e localização sub‐celular de proteínas codificadas por genes clonados: imunodetecção e fusões‐GFP.

Mutagénese dirigida e engenharia de proteínas. Interrupção e eliminação de genes.

Tecnologia do RNAi

Aplicações em Saúde, Biotecnologia, Agricultura e Ambiente.

Métodos de ensino

A componente teórico-prática integra a apresentação dos fundamentos teóricos incluídos no programa. Será seguida uma metodologia de exposição interativa estimulando a discussão dos temas apresentados. Serão apresentados exemplos e questões problemáticas para discussão e resolução pelos estudantes, utilizando também ferramentas bioinformáticas e com recurso a bases de dados.

Nas aulas de OT pretende-se que os alunos discutam alguns protocolos práticos que permitem a clonagem e expressão de genes em Escherichia coli. Pretende-se também que os alunos executem algumas tarefas desses protocolos, de modo a consolidar os conhecimentos adquiridos durante as TP.

Bibliografia

T.A. Brown, 2010. Gene cloning and DNA analysis : an introduction. 6ª ed. Wiley-Blackwell.

Sambrook & Russel. 2001. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 3ª ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press.

S.B. Primrose & R.M. Twyman. 2006. Principles of gene manipulation and genomics. 7ª ed. Blackwell Publishing.

Desmond S. T. Nicholl. 2008. An Introduction to Genetic Engineering. 3ª ed. Cambridge University Press.